Posible implicación del receptor dopaminérgico D2 y la aromatasa P450 en el desarrollo de adenomas espontáneos hipofisarios

Universidad de Salamanca
Facultad de Medicina
Dpto. de Anatomía e Histología Humanas









Posible implicación del receptor dopaminérgico D2 y
la aromatasa P450 en el desarrollo de adenomas es-
pontáneos hipofisarios.



Sonia Gutiérrez Gabriel



Salamanca, 2009 Tesis Doctoral Sonia Gutiérrez Gabriel Salamanca, 2009

2 Tesis Doctoral Sonia Gutiérrez Gabriel Salamanca, 2009


José CARRETERO GONZÁLEZ, Catedrático de Embriología y Anatomía
Humana, de la Facultad de Medicina de la Universidad de Salamanca, en su
calidad de Directores del trabajo de Tesis Doctoral,


CERTIFICA:
Que el trabajo titulado:
Posible implicación del receptor dopaminérgico D2 y la aromatasa
P450 en el desarrollo de adenomas espontáneos hipofisarios
Ha sido realizado bajo mi dirección por la Lda. Dña. Sonia Gutiérrez Gabriel,
en los laboratorios de Neuroanatomía Humana y Neuroendocrinología Experi-
mental del Instituto de Neurociencias de Castilla y León, ubicados en el De-
partamento de Anatomía e Histología Humanas de la Facultad de Medicina de
la Universidad de Salamanca.
Que, a mi entender, el trabajo reúne los requisitos suficientes de experimen-
talidad, originalidad e interés científico y aplicativo como para ser presentado
y defendido como trabajo de Tesis Doctoral.

Y, para que así conste, firmo la presente en Salamanca a 29 de Junio de
2009.


José Carretero González


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Índice
Índice ................................................................................. 5
Prólogo................................................................................ 9
Agradecimientos ...................................................................13
Introducción ........................................................................15
Adenomas hipofisarios. El Prolactinoma.............................................17
Prolactina ................................................................................23
Estructura química de la Prolactina ......................................................... 25
Regulación génica de la Prolactina .......................................................... 25
Acciones biológicas de la Prolactina......................................................... 26
Secreción de Prolactina. ....................................................................... 28
Ritmo circadiano de liberación. ................................................................... 28
Niveles basales. ...................................................................................... 29
Mecanismos de regulación .......................................................................... 29
Hipótesis del Estudio ..............................................................33
Antecedentes ............................................................................35
Hipótesis..................................................................................40
Objetivo del estudio....................................................................43
Material y Métodos.................................................................45
Obtención de las muestras.............................................................47
Adenomas humanos. ............................................................................ 47
Clasificación de los tumores........................................................................ 47
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Determinación de los niveles basales de prolactina. ..................................... 48
Adenomas hipofisarios espontáneos en ratas viejas. ..................................... 48
Clasificación de los tumores........................................................................ 49
Ratones knock out para los genes de aromatasa o del receptor dopaminérgico D2. 49
Procedencia de los animales. ...................................................................... 49
Determinación de la deleción génica. Genotipaje por PCR. ................................... 49
Procesado de las muestras.............................................................52
Inclusión en parafina. .......................................................................... 52
Inmunocitoquímica......................................................................53
Anticuerpos empleados. ....................................................................... 53
Protocolo inmunocitoquímico................................................................. 53
Tampones utilizados. ........................................................................... 54
TBS: Trizma base Sigma ® 0.5M con CLNa al 8%, rectificando Ph hasta 7.4. Diluido
posteriormente 1:10 para conseguir 0.05M............................................................. 54
TB: Similar preparación al anterior sin ClNa. Utilizado para revelar con 3-
3´diaminobencidina ....................................................................................... 54
Controles de la reacción. ...................................................................... 54
Estadística................................................................................55
Tratamiento de los Textos y figuras. Edición final.................................55
Resultados...........................................................................57
Incidencia de los adenomas espontáneos en ratas viejas de la cepa Wistar...58
Prevalencia de los prolactinomas en los adenomas espontáneos de ratas viejas.
..................................................................................................60
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Demostración inmunocitoquímica de la coexistencia de positividad para la
prolactina y la isoforma D2L del receptor dopaminérgico D2 en los prolactinomas.
..................................................................................................62
Inmunocitoquímica para la isoforma D2L del receptor dopaminérgico D2 en los
prolactinomas espontáneos. ................................................................66
Anomalías estructurales y patrones de reacción en las células positivas a la
isoforma D2L del receptor dopaminérgico D2............................................70
Demostración inmunocitoquímica de la coexistencia de positividad para la
prolactina y la aromatasa en los prolactinomas. ........................................74
Adenomas espontáneos en ratones knock out y wilde type.......................75
Adenomas espontáneos en ratones knock out y wilde type.......................76
Prevalencia de los adenomas en ratones. ...........................................78
Prevalencia de los prolactinomas en ratones .......................................80
Adenomas humanos.....................................................................82
Prolactinomas.................................................................................... 82
Positividad a la aromatasa p450 en los prolactinomas humanos ....................... 84
Positividad a la isoforma D2L del receptor dopaminérgico en los prolactinomas
humanos ................................................................................................ 86
Discusión ............................................................................89
Prolactinomas y Aromatasa............................................................91
Prolactinomas y Receptor dopaminérgico D2L......................................95
Conclusiones ...................................................................... 103
Bibliografía........................................................................ 107
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Prólogo
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