Acetiltransferasas de histonas en Candida albicans: análisis del perfil transcripcional

Departamento de Microbiología y Genética

Instituto de Biología Funcional y Genómica





ACETILTRANSFERASAS DE HISTONAS EN
Candida albicans:
ANÁLISIS DEL PERFIL TRANSCRIPCIONAL






Memoria presentada por Dª. Rosa María Dégano Blázquez para optar al
grado de Doctor en Biología

2011



Dr. Ángel Domínguez Olavarri Catedrático de Microbiología de la Universidad
de Salamanca



CERTIFICA:



Que la Tesis Doctoral titulada: “Acetiltransferasas de histonas en Candida
albicans: Análisis del perfil transcripcional” presentada por la Lda: Rosa María Dégano
Blázquez, ha sido realizada bajo su dirección en el Departamento de Microbiología y
Genética de la Universidad de Salamanca.

Y para autorizar su presentación y evaluación por el tribunal correspondiente
firma este certificado en Salamanca a de de 2011.






Fdo: Dr. Ángel Domínguez Olavarri



Dr. Ángel Domínguez Olavarri, Director del Departamento de Microbiología y
Genética de la Universidad de Salamanca



CERTIFICA:



Que la memoria titulada: “Acetiltransferasas de histonas en Candida albicans.
Análisis del perfil transcripcional” presentada por la Lda. Rosa María Dégano Blázquez,
para optar al grado de Doctor en Biología, ha sido realizada bajo la dirección del Dr.
Ángel Domínguez Olavarri en el Departamento de Microbiología y Genética de la
Universidad de Salamanca.

Y para que así conste, expide y firma la presente certificación en Salamanca,
a de de 2011.






Fdo: Dr. Ángel Domínguez Olavarri



























Este trabajo ha sido parcialmente financiado por los proyectos:

Glycoshield: surface modulation of the fungal and host response using a genomic
approach. Redes del Espacio Europeo de Investigación (esquema ERA-NET).
GEN2006-27775-C2-E/PAT.

“Histona acetiltransferasas en Candida albicans efecto sobre dimorfismo y virulencia.
Una aproximación Post-genómica” (SA 141ª08). Junta de Castilla y León.



Índice

I. INTRODUCCIÓN
1. ASPECTOS GENERALES DE LA BIOLOGÍA DE Candida albicans. POSICIÓN
TAXONÓMICA……………………………………………………………...…………………………1
2. IMPORTANCIA DEL GÉNERO CANDIDA COMO AGENTE PATÓGENO……………………..4
2.1. Tratamiento de las candidiasis……………………………………………………………..6
2.2. Factores de virulencia de Candida albicans……………………………………………….8
2.3. Transición dimórfica en Candida albicans………………………………………...……..12
2.4. Dimorfismo en Candida albicans………………………………………………...………14
3. RUTAS DE TRANSDUCCIÓN DE SEÑALES…………………………………………………....17
3.1. Ruta de proteínas quinasas activada por mitógeno (ruta MAPK)………………..……….17
3.2. Ruta de la proteína quinasa A dependiente de cAMP (ruta PKA-cAMP)……….…….…19
3.3. Otras rutas inductoras de la filamentación………………………………………………..24
3.4. Regulación negativa de la filamentación…………………………………………………25
4. EL OVILLO DINÁMICO DE LA VIDA: LA CROMATINA……………………………………..27
4.1. Composición estructural de la cromatina………………………………………………....28
4.2. Mecanismos de regulación transcripcional. Características generales…………………...30
4.3. Papel de los procesos de acetilación-desacetilación de histonas en la regulación
transcripcional…………………………………………………………………………............32
4.4. El “código histona”…………………………………………………………………….…34
4.5. Complejos acetiltransferasa de histonas (complejos HATs)…………………………..…34
4.6. Complejos acetiltransferasa de histonas multifuncionales…………………………….....38
4.7. Acetiltransferasa de histona 1 de Saccharomyces cerevisiae, ScHat1p………………….39
4.8. Acetiltransferasa de histona 5 de Saccharomyces cerevisiae, ScGcn5p…………...……..42
4.9. Acetiltransferasas de histonas en Candida albicans……………………………...………45
5. ANÁLISIS DE LA REGULACIÓN DE LA EXPRESIÓN GÉNICA MEDIANTE
MICROARRAYS…………………………………………………………………………….......45
II. OBJETIVOS
1. OBJETIVOS DE ESTE TRABAJO......…………………………………………………………….49
III. MATERIALES Y MÉTODOS
1. MICROORGANISMOS UTILIZADOS…………………………………………………………....51
1.1. Cepas de Candida albicans…………………………………………………………….....51
1.2. Cepas de Escherichia coli………………………………………………………………...52

I
Índice

2. MEDIOS Y CONDICIONES DE CULTIVO…………………………………...………………….52
2.1. Medios y condiciones de cultivo de Escherichia coli…………………………………….52
- Medio LB
2.2. Medios y condiciones de cultivo de Candida albicans………………………………......52
2.2.1. Crecimiento levaduriforme…………………………………………………….53
- YNB
- YEPD
- Medio Lee
- Medio Mínimo (también llamado medio SD) con sorbitol 1M
- Medio Mínimo suplementado con 5-FOA y uridina
2.2.2. Inducción del crecimiento filamentoso en medio sólido………………………54
- Medio embebido
- Medio SLAD
- Medio Spider
- Medio Lee + 4% suero
- Medio Lee + N-Acetil-glucosamina
2.2.3. Inducción del crecimiento filamentoso en medio líquido……………………...56
- Inducción por cambio de temperatura
- Inducción por cambio de temperatura y presencia de suero
- Inducción por cambio de pH
- Inducción por N-acetilglucosamina (NAcGlc) y cambio de pH
2.2.4. Inducción de la formación de clamidosporas…………………………………..57
2.3. Mantenimiento de los microorganismos……………………………………………