La lecture à portée de main
205
pages
Français
Documents
Écrit par
Fadi Kheder
Publié par
Thesee
Obtenez un accès à la bibliothèque pour le consulter en ligne En savoir plus
Découvre YouScribe en t'inscrivant gratuitement
Découvre YouScribe en t'inscrivant gratuitement
205
pages
Français
Ebook
Obtenez un accès à la bibliothèque pour le consulter en ligne En savoir plus
AVERTISSEMENT
Ce document est le fruit d’un long travail approuvé par le jury de
soutenance et mis à disposition de l’ensemble de la communauté
universitaire élargie.
Il est soumis à la propriété intellectuelle de l’auteur au même titre que sa
version papier. Ceci implique une obligation de citation et de
référencement lors de l’utilisation de ce document.
D’autre part, toute contrefaçon, plagiat, reproduction illicite entraîne une
poursuite pénale.
Contact SCD INPL : scdinpl@inpl-nancy.fr
LIENS
Code de la propriété intellectuelle. Articles L 122.4
Code de la propriété intellectuelle. Articles L 335.2 – L 335.10
http://www.cfcopies.com/V2/leg/leg_droi.php
http://www.culture.gouv.fr/culture/infos-pratiques/droits/protection.htm
INSTITUT NATIONAL POLYTECHNIQUE DE LORRAINE
Ecole Nationale Supérieure d’Agronomie et des Industries Alimentaires
Ecole doctorale : Ressources Procédés Produits Environnement
THESE
présentée à l’INPL par
Fadi KHEDER
pour obtenir le grade de
DOCTEUR DE L’INSTITUT NATIONAL POLYTECHNIQUE DE LORRAINE
Spécialité : Procédés Biotechnologiques et Alimentaires
Production et purification d’acide férulique estérases.
Application à la synthèse d’esters phénoliques
Soutenue publiquement le 25 octobre 2007 devant la commission d’examen
Rapporteurs : M. Eric DUBREUCQ : Professeur
M. Pierre VILLENEUVE : Chargé de Recherche (HDR)
Examinateurs : M. Armand GUCKERT : Professeur
M. Sylvain GUYOT : Chargé de Recherche (HDR)
M. Michel GIRARDIN : Professeur (directeur de thèse)
M. Stéphane DELAUNAY : Maître de conférences (co-directeur de thèse)
M. Lionel MUNIGLIA : Maître de conférences (co-directeur de thèse, invité)
INSTITUT NATIONAL POLYTECHNIQUE DE LORRAINE
Ecole Nationale Supérieure d’Agronomie et des Industries Alimentaires
Ecole doctorale : Ressources Procédés Produits Environnement
THESE
présentée à l’INPL par
Fadi KHEDER
pour obtenir le grade de
DOCTEUR DE L’INSTITUT NATIONAL POLYTECHNIQUE DE LORRAINE
Spécialité : Procédés Biotechnologiques et Alimentaires
Production et purification d’acide férulique estérases.
Application à la synthèse d’esters phénoliques
Soutenue publiquement le 25 octobre 2007 devant la commission d’examen
Rapporteurs : M. Eric DUBREUCQ : Professeur
M. Pierre VILLENEUVE : Chargé de Recherche (HDR)
Examinateurs : M. Armand GUCKERT : Professeur
M. Sylvain GUYOT : Chargé de Recherche (HDR)
M. Michel GIRARDIN : Professeur (directeur de thèse)
M. Stéphane DELAUNAY : Maître de conférences (co-directeur de thèse)
M. Lionel MUNIGLIA : Maître de conférences (co-directeur de thèse, invité)
Remerciements
J’exprime mes remerciements les plus sincères à Monsieur le Professeur Michel
Girardin pour m’avoir donné la possibilité de réaliser ce travail ainsi que pour son
encadrement et ses conseils. Je remercie également Messieurs Stéphane Delaunay et
Lionel Muniglia, Maîtres de Conférence à l’ENSAIA, pour leur amitié et pour avoir
suivi et co-dirigé cette thèse.
Je remercie Monsieur Eric Dubreucq, Professeur à l’Université de Montpellier et
Monsieur Pierre Villeneuve, Chargé de Recherche au CIRAD de Montpellier, qui ont
accepté de juger ce travail de thèse en qualité de rapporteurs. Je remercie également
Messieurs Sylvain Guyot, Chargé de Recherche à l’INRA et Armand Guckert,
Professeur à l’ENSAIA, pour avoir accepté d’examiner ce travail.
Je tiens à exprimer mes plus sincères remerciements à mon frère Ghassan Abo
Chameh, qui a participé à la réalisation de ce travail de thèse en qualité d’étudiant en
Mastère, pour son soutien, sa disponibilité, ses idées et ses conseils contribuant toujours
à enrichir cette recherche.
Je remercie également Mesdames Catherine Humeau et Bernadette Piffaut ainsi
que Monsieur Bernard Rovel (Maîtres de Conférence) et surtout Marie-Noëlle
Stutzmann (adjoint technique) et tous les autres membres du Laboratoire Biocatalyse
Bioprocédés à l’ENSAIA pour leur amitié, leur encouragement et leur soutien au cours
de ces années.
Je remercie tout particulièrement le gouvernement syrien d’avoir financé ces
travaux de thèse ainsi que mes Professeurs à la Faculté des Sciences à Damas
notamment Madame le Professeur Haifa Al-Azmeh.
Finalement, je tiens à remercier ma famille ainsi que tous mes amis en France et
en Syrie pour leur amitié et leur encouragement sans limite.
SOMMAIRE GENERAL
Introduction………………………………………………………………………….. 1
Chapitre 1. Synthèse bibliographique
I. Rôle naturel des acide férulique estérases……………………………………….. 3
II. Les acide férulique estérases……………………………………………………. 17
III. Les Streptomyces ……………………………………………………………... 39
IV. Synthèse d’esters par voie enzymatique : une utilisation récente des acide
férulique estérases………………………………………………………………….. 43
Objectifs de l’étude…………………………………………………………………... 55
Chapitre 2. Matériels et méthodes
I. Sources d’acide férulique estérases...…………………………………………… 57
II. Produits chimiques……………………………………………………………… 58
III. Composition et préparation des milieux de culture……………………….…… 60
IV. Conditions de culture…………………………………………………………... 62
V. Mesure de l’activité acide férulique estérase…………………………………… 66
VI. Protocole de purification des acide férulique estérases………………………... 68
VII. Méthodes analytiques…………………………………………………………. 72
VIII. Protocoles des synthèses enzymatiques……………………………………… 80
Chapitre 3. Production et purification partielle de l’acide férulique estérase de S.
ambofaciens ATCC 23877
I. Choix des conditions d’induction de la synthèse d’acide férulique estérase par S.
ambofaciens ATCC 23877……………………………………………….………… 82
II. Production de l’acide férulique estérase par S. ambofaciens ATCC 23877……. 111
Chapitre 4. Purification partielle de l’acide férulique estérase de Humicola sp.
TMI. Détection de l’activité acide férulique estérase dans le Depol 740L………….. 121
TM II. Purification partielle de l’acide férulique estérase présente dans le Depol
740L………………………………………………………………………………... 122 Chapitre 5. Caractérisation partielle des acide férulique estérases
1. Influence de l’acide férulique sur l’activité acide férulique estérase de S.
ambofaciens ATCC 23877………….…………………...……………………….… 131
2. Effet du pH et de la température……….………………………………………... 132
3. Spécificité de substrat des acide férulique estérases….…………………………. 134
Chapitre 6. Utilisation des acide férulique estérases en synthèse
I. Utilisation de l’acide férulique estérase de S. ambofaciens ATCC 23877 en
synthèse....………………………………………………………………………….. 139
II. Utilisation de l’acide férulique estérase de Humicola sp. en synthèse…….…… 140
Conclusions et perspectives ………………………………………………………… 157
Annexe……………………………………………………………………………….. 162
Références bibliographiques………………………………………………………... 164
Abréviations
ABC : acide bicinchoninique
AF : férulique
AFE : acide férulique estérase
ASB : albumine sérique bovine
CEA : chromatographie échangeuse d'anions
CEC : chromatographie échangeuse de cations
CEI : chromatographie échangeuse d'ions
CIH : chromatographie d’interactions hydrophobes
CLHP : chromatographie liquide à haute performance
DMF : N,N-diméthylformamide
DX : dextrines blanches
FE : férulate d’éthyle
FM : fe méthyle
GL : glucose
kDa : kilo Dalton
M B: 2-méthylbutan-2-ol 2 2
MOPS : 3-(N-morpholino)propanesulfonique
PB : pectine de betterave
rpm : rotation par minute
SA : sulfate d’ammonium
SB : son de blé désamidonné
SDS-PAGE : sodium dodécyle sulfate- électrophorèse sur gel de
polyacrylamide
SM : son de maïs désamidonné
TC : tourteau de colza
TEMED