UNIVERSITE LOUIS PASTEUR DE STRASBOURG

UNIVERSITE LOUIS PASTEUR DE STRASBOURG

THESE

Présentée pour obtenir le grade de

DOCTEUR DE L’UNIVERSITE LOUIS PASTEUR DE STRASBOURG


Discipline : Sciences du Vivant

Spécialité : Aspects Moléculaires et Cellulaires de la Biologie

par

Sandra Welsch


Dérégulation de la Protéine Apparentée à l’Hormone
Parathyroïde (PTHrP) et du Récepteur PTH/PTHrP
(Récepteur PTH1) dans l’Hypertension Artérielle en
réponse à l’Angiotensine II



Laboratoire de Pharmacologie et Physiopathologie Rénales
U727 INSERM-ULP (Directeur : Dr JJ. Helwig)
Faculté de Médecine, Strasbourg



Soutenue le 21 juin 2005 devant la commission d’examen :

P. Corvol Examinateur A. Parini Rapporteur externe V. Schini-Kerth Rapporteur interne
C. Silve JJ. Helwig Examinateur
M. Barthelmebs Directeur de thèse
1







« Les os peuvent se briser,
Les muscles s’atrophier,
Les glandes peuvent tarir,
Le cerveau lui-même peut s’endormir
Sans mettre en danger la vie.
Mais que les reins défaillent
Et c’est la mort des os, des glandes et du cerveau… »


W. Homer Smith – Fish to Philosopher (1953)
















2




A mes grands-parents

A Eric


A mes parents


A ma sœur


A ma famille


A tous ceux qui me sont chers





Je les remercie pour leur soutien constant, leur aide et leur réconfort durant toutes ces
années, qu’ils trouvent dans ce mémoire le témoignage de toute mon affection et de ma
profonde reconnaissance.















3Remerciements


Je remercie profondément Madame le Docteur Mariette Barthelmebs, Directrice de recherche au
CNRS, qui a assuré la direction de ce travail et m’a initiée à la recherche. Je lui suis particulièrement
reconnaissante pour son accessibilité, sa disponibilité et pour tout le temps qu’elle a consacré à ma
thèse. Je la remercie de m’avoir accordé sa confiance et prodigué son aide durant mon séjour au
laboratoire.


Je remercie chaleureusement le Docteur Jean-Jacques Helwig, Directeur de recherche à l’INSERM et
Directeur du Laboratoire de Pharmacologie et Physiopathologie Rénales, pour m’avoir accueillie au sein
de son unité, pour son écoute, son appui ainsi que pour son investissement dans ce travail.


J’exprime toute ma reconnaissance envers les membres de mon jury de thèse, Mesdames le Docteur
Caroline Silve et le Professeur Valérie Schini-Kerth, Messieurs le Professeur Pierre Corvol et le
Docteur Angelo Parini qui me font l’honneur d’accepter de juger ce travail.


Je remercie également vivement le Docteur Thierry Massfelder, Chargé de recherche à l’INSERM pour
m’avoir initié à la biologie moléculaire, pour sa disponibilité, ses compétences scientifiques, ses précieux
conseils, et sa collaboration dans une ambiance toujours joyeuse et efficace.


Mes remerciements très particuliers vont à Monsieur Eric Schordan, pour son aide quotidienne, son
réconfort et son soutien moral dans toutes mes démarches. Je lui suis reconnaissante de m’avoir épaulée
en toutes circonstances et supportée jour après jour durant toutes ces années. Merci à toi.


Cette thèse est l’occasion d’exprimer mes remerciements les plus chaleureux à l’ensemble des membres
du Laboratoire de Pharmacologie et Physiopathologie Rénales qui ont tous participé à la réalisation de ce
travail.

A Madame Sylvie Rothhut, pour son amitié chaleureuse, son dévouement, sa disponibilité ainsi que
pour l’intérêt qu’elle a porté à mon travail.

A Mesdames Suzanne Wendling, Virginie Roques et Danièle Kuhlwein pour leur aide technique et les
travaux de secrétariat.

A Monsieur Alain Lambert, ingénieur à l’INSERM, pour sa précieuse aide technique en physiologie.

A Madame Catherine Coquard pour sa sympathie et sa bonne humeur.

A tous mes amis du laboratoire, Mesdemoiselle Sabrina Danilin et Carole Sourbier, et Monsieur
Abdelali Agouni ainsi que Messieurs les Docteurs Benoît Escande et Samuel Fritsch, pour leur
sympathie, leur soutien et leur bonne humeur quotidienne.


Qu’ils trouvent tous ici l’expression de mon entière reconnaissance.


4Abréviations

AC : adénylate cyclase
ADN : acide désoxyribonucléique
AGT : angiotensinogene
AMPc : adénosine monophosphate cyclique
Ang I : angiotensine I
Ang II : angiotensine II
ANP : peptide natriurétique atrial
ARNm : acide ribonucléique messager
ATP : adénosine triphosphate

BSA : sérum albumine de bœuf
Bmax : capacité maximale de liaison

CaR : récepteur sensible au calcium
CE : concentration efficace 50 50
CML : cellule musculaire lisse (r : rat, m : souris)
- Ao : aortique
- Rv : rénovasculaire
- V : vasculaires
CRE : élément répondant à l’AMPc

DAG : diacylglycérol
DMEM : Dulbecco’s Modified Eagle Medium
DOCA: acétate de déoxycorticostérone

ECA: enzyme de conversion de l’angiotensine I
EDTA : acide éthylène diamine tétraacétique
EGF : facteur de croissance épithélial

FBS : sérum fœtal de bœuf
FGF : facteur de croissance fibroblastique

GAPDH : glycéraldéhyde-3-phosphate déshydrogénase
GC : guanylate cyclase
GMPc : guanosine monophosphate cyclique
GRKs : kinases des récepteurs couplés aux protéines G

H O : peroxyde d’hydrogène 2 2
HHM : hypercalcémie humorale maligne
HTA : hypertension artérielle
5HTLV-1 : human T cell leukemia virus de type 1

IGF : insuline growth factor
IL-1 : interleukine 1
IP-3 : inositol triphosphate
i.a. : intra-artériel
i.p. : intra-péritonéal
i.v. : intra-veineux

NADPH : nicotinamide adénine dinucléotide phosphate déshydrogénase
NHERF : Na/H exchanger regulatory factor
NLS: signal de location nucléaire
NO: monoxyde d’azote
NOS : synthase du monoxyde d’azote

-O : anion superoxide 2

PBS : phosphate buffer saline
pcDNA : plasmide complementary désoxyribonucléic acid
PKA : protéine kinase A
PKC : protéine kinase C
PLC : phospholipase C
PMSF : phénylméthyl-sulfonyl fluorure
PTH : hormone parathyroïdienne
PTHrP: protéine apparentée à l’hormone parathyroïdienne

RCPG : récepteurs couplés aux protéines G
ROS : espèces réactives de l’oxygène
R-PTH1 : récepteur à l’hormone parathyroïdienne de type 1
RT-PCR : transcription réverse-réaction de polymérisation en chaine
RVR : résistance vasculaire rénale

SHR : rat spontanément hypertendu
NLS : signal de localisation nucléaire
SOD : superoxyde dismutase
SRA : système rénine-angiotensine

TIP 39: peptide tubéroinfundibulaire de 39 acides aminés
TGF-β: facteur de croissance tumoral
TNF-α: facteur de nécrose tumorale

WKY : Wistar Kyoto
6Sommaire

Abréviations ……………………………………………………………………………………5
Préface………………………………………………………………………………………….12
CHAPITRE I : Introduction Bibliographique……………………… 13
La Protéine Apparentée à l’Hormone Parathyroidienne ….…………………………..14
De l’hypercalcémie maligne à la PTHrP……………………………………………………………14
L’HHM, une vieille histoire………………………………………………………………………………..14
Caractérisation et isolement de la PTHrP ………………………….…..15
PTHrP et HHM……………………………………………………………………………………………..15
Structure du gène ……………………………………………………………………………………..16
Région promotrice………………………………………………………………………………………...17 codante……………………………………………………………………………………………18 3’…………………………………………………………………...19
La PTHrP, une famille de peptides………………………………………………………………… 19
Séquence signal prépro…………………………………………………………………………………. 20
Le fragment N-terminal : PTHrP(1-36)……………………….21
Les fragments intermédiaires……………………………………………………………………………21
Le fragment C-te(107-139)……………………………..22 rminal extrême : PTHrP(141-173)…………………………………………………..22
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