MINISTERE DE LA JEUNESSE DE L'EDUCATION NATIONALE

MINISTERE DE LA JEUNESSE, DE L’EDUCATION NATIONALE
ET DE LA RECHERCHE


ECOLE PRATIQUE DES HAUTES ETUDES

Sciences de la Vie et de la Terre


MEMOIRE

Présenté par

Violaine TRIBOLLET


Pour l’obtention du diplôme de l’Ecole Pratique des Hautes Etudes

Caractérisation des propriétés et activités des
six isoformes de p63


Soutenu le 7 mars 2007

Devant le jury composé de :
Docteur Claude CARON de FROMENTEL, Examinateur Professeur Jean Marie EXBRAYAT,
Docteur Sylvie GAZZERI, Pierre HAINAUT, Examinateur
Docteur Flore RENAUD-PAÏTRA, Présidente



Laboratoire EPHE : Reproduction et Développement des Vertébrés
Université Catholique de Lyon, 25 rue du Plat – 69 288 Lyon Cedex 02
Directeur pédagogique : Jean-Marie EXBRAYAT (jmexbrayat@univ-catholyon.fr)



Laboratoire d’accueil : INSERM U590 Oncogenèse et Progression Tumorale
Directeur : Alain PUISIEUX
Centre Léon Bérard, 28 rue Laënnec – 69 373 Lyon Cedex 08
Directeur scientifique : Claude CARON de FROMENTEL (CARONDEF@lyon.fnclcc.fr)

Caractérisation des propriétés et activités
des six isoformes de p63

La famille p53 est composée de trois gènes, TP53, TP63 et TP73. Ces gènes codent pour
plusieurs isoformes parmi lesquelles on distingue des formes transactivatrices TA et des formes
tronquées d’une partie du domaine de transactivation présent en N-terminal, appelées DN. Les
formes TA sont des facteurs de transcription qui modulent l’expression de nombreux gènes cibles
impliqués dans l’arrêt du cycle cellulaire, l’apoptose, ou la sénescence. Les formes DN inhibent
EPHE Banque de Monographies SVT 1l’activité des formes TA. De ce fait, la prolifération et la survie des cellules sont étroitement
dépendantes de l’équilibre entre ces deux formes.
Si les fonctions des membres de la famille p53 commencent à être mieux identifiées, les mécanismes
qui régissent leur expression et leur stabilité sont encore peu connus. Pour cette raison, nous avons
entrepris d’étudier les six isoformes de p63, en termes de stabilité et d’activité.
Pour cela, nous avons analysé l’expression, les modifications post-traductionnelles, la demi-
vie, ainsi que la dégradation des isoformes, après surexpression transitoire ou stable de chacune des
isoformes de p63 dans les cellules Hep3B. Cette étude a été réalisée en présence et en absence de
stress génotoxique avec de la doxorubicine.
En absence de stress, l’expression des différentes isoformes est variable. Leur demi-vie est assez
courte (moins d’une heure), excepté pour l’isoforme DNp63g, et leur dégradation est dépendante du
protéasome. Dans les clones stables, l’expression semble être inversement proportionnelle à l’activité
anti-proliférative exercée par l’isoforme étudiée. Le traitement à la doxorubicine induit une
augmentation du taux d’expression des six isoformes. Cette augmentation s’accompagne d’une
hyperphosphorylation de certaines isoformes (a et b). De plus, nos résultats suggèrent que cette
augmentation d’expression pourrait être due à une diminution de la dégradation de p63 par le
protéasome.
L’étude présentée a permis de mieux caractériser les isoformes de p63 et surtout, de comparer les
propriétés des six isoformes dans un même environnement cellulaire. L’étape suivante consistera à
étudier et comparer leurs activités et fonctions dans notre modèle cellulaire.

Mots clés : TP63, stabilité, activités, modifications post-traductionnelles, réponse au stress



SOMMAIRE


INTRODUCTION...................................................................................................................................... - 1 -
LA CANCEROGENESE...................................................................................................................... 1
I. LE CANCER..................................................................................................................................... 1
A. Définition.................................................................................................................................... 1
B. Classification des tumeurs.............................................................................................................. 1
C. Processus de Cancérogenèse........................................................................................................... 2
II. MÉCANISMES IMPLIQUÉS DANS LA TUMORIGENÈSE.............................................................................. 3
A. Le cycle cellulaire......................................................................................................................... 3
1.
Généralités.................................................................................................................................................................................................
3
2. Contrôle du cycle cellulaire..................................................................................................................................................................
4
a.
Généralités............................................................................................................................................................................................
EPHE Banque de Monographies SVT 24
b. Les différents complexes cycline/Cdk au cours du cycle cellulaire.................................................................................... 4
c. Régulation des complexes cycline/Cdk...................................................................................................................................... 5
B. Mort cellulaire............................................................................................................................. 6
1. Les différents types de mort cellulaire............................................................................................................................................... 6
2.
L’apoptose.................................................................................................................................................................................................
6
a. Phase
d’initiation............................................................................................................................................................................... 7
b. Phase de
décision7
c. Phase de dégradation cellulaire......................................................................................................................................................
7
C. La sénescence cellulaire................................................................................................................. 9
III. DIFFÉRENTS FACTEURS À L’ORIGINE DE LA TUMORIGENÈSE................................................................. 9
LA FAMILLE TP53........................................................................................................................... 12
I. LES DIFFÉRENTS MEMBRES DE LA FAMILLE TP53............................................................................... 12
II. P53 CHEZ L’HOMME..................................................................................................................... 12
A. Structure génomique et protéique de p53......................................................................................... 12
B. Les différentes formes de p53........................................................................................................ 13
C. Activités et fonctions de p53.......................................................................................................... 14
III. P73 CHEZ L’HOMME.................................................................................................................... 16
A. Structure génomique et protéique de p73 16
B. Les différentes formes de p7316
C. Expression et rôles de p73............................................................................................................ 17
IV. P63 CHEZ L’HOMME18
A. Structure génomique et protéique de p63......................................................................................... 18
V. RELATIONS ENTRE LES DIFFÉRENTS