MINISTERE DE L'EDUCATION NATIONALE
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Niveau: Supérieur
MINISTERE DE L'EDUCATION NATIONALE ECOLE PRATIQUE DES HAUTES ETUDES Sciences de la Vie et de la Terre MEMOIRE Présenté Par Hélène SAKLANI pour l'obtention du diplôme de l'Ecole Pratique des Hautes Etudes Analyse cinétique de la population des lymphocytes T CD4 murins après immunisation entérale avec Listeria monocytogenes recombinante Soutenu le 16 janvier 2002 devant le jury suivant : Monsieur le Professeur Jean-François JEANNIN - Président Monsieur le Professeur Jean-Claude GLUCKMAN - Rapporteur Madame le Professeur Dominique MAZIER - Examinateur Monsieur le Docteur Pierre GOOSSENS - Examinateur Laboratoire d'Immunologie Cellulaire - Directeur : Pr. Jean-Claude GLUCKMAN E.P.H.E. (Sciences de la Vie et de la Terre) INSERM E 00-13- Hôpital Saint-Antoine, 184 rue du Fbg Saint-Antoine, 75571 Paris cedex 12 ; e-mail : Unité d'Immunophysiologie et Parasitisme Intracellulaire - Chef d'Unité : Dr. Geneviève MILON Institut Pasteur, 28 rue du Dr Roux 75015 Paris ; e-mail directeur de stage : ECOLE PRATIQUE DES HAUTES ETUDES SCIENCES DE LA VIE ET DE LA TERRE Analyse cinétique de la population des lymphocytes T CD4 murins après immunisation entérale avec Listeria monocytogenes recombinante EPHE Banque de Monographies SVT 1
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MINISTERE DE L'EDUCATION NATIONALE ECOLE PRATIQUE DES HAUTES ETUDES Sciences de la Vie et de la Terre MEMOIRE Présenté Par Hélène SAKLANI pour l'obtention du diplôme de l'Ecole Pratique des Hautes Etudes Analyse cinétique de la population des lymphocytes T CD4 murins après immunisation entérale avec Listeria monocytogenes recombinante Soutenu le 16 janvier 2002 devant le jury suivant : Monsieur le Professeur Jean-François JEANNIN - Président Monsieur le Professeur Jean-Claude GLUCKMAN - Rapporteur Madame le Professeur Dominique MAZIER - Examinateur Monsieur le Docteur Pierre GOOSSENS - Examinateur Laboratoire d'Immunologie Cellulaire - Directeur : Pr. Jean-Claude GLUCKMAN E.P.H.E. (Sciences de la Vie et de la Terre) INSERM E 00-13- Hôpital Saint-Antoine, 184 rue du Fbg Saint-Antoine, 75571 Paris cedex 12 ; e-mail : Unité d'Immunophysiologie et Parasitisme Intracellulaire - Chef d'Unité : Dr. Geneviève MILON Institut Pasteur, 28 rue du Dr Roux 75015 Paris ; e-mail directeur de stage : ECOLE PRATIQUE DES HAUTES ETUDES SCIENCES DE LA VIE ET DE LA TERRE Analyse cinétique de la population des lymphocytes T CD4 murins après immunisation entérale avec Listeria monocytogenes recombinante EPHE Banque de Monographies SVT 1
- point chez la souris balb
- listeria monocytogenes
- infection par inoculation par voie
- réponses immunitaires chez la souris
- immunisation
- capacité des cellules
- cd4 murins après immunisation entérale
- monocytogenes recombinante
MINISTERE DE L'EDUCATION NATIONALE ECOLE PRATIQUE DES HAUTES ETUDES
Sciences de la Vie et de la Terre
MEMOIRE Présenté Par
Hélène SAKLANI pour l'obtention du diplôme de l'Ecole Pratique des Hautes Etudes Analyse cinétique de la population des lymphocytes T CD4 murins après immunisation entérale avec Listeria monocytogenesrecombinante Soutenu le 16 janvier 2002 devant le jury suivant : Monsieur le Professeur Jean-François JEANNIN - Président Monsieur le Professeur Jean-Claude GLUCKMAN - Rapporteur Madame le Professeur Dominique MAZIER - Examinateur Monsieur le Docteur Pierre GOOSSENS -Examinateur Laboratoire d'Immunologie Cellulaire - Directeur : Pr. Jean-Claude GLUCKMAN E.P.H.E. (Sciences de la Vie et de la Terre) INSERM E 00-13- Hôpital Saint-Antoine, 184 rue du Fbg Saint-Antoine, 75571 Paris cedex 12 ; e-mail : jc.gluckman@sat.ao-hop-paris.fr Unité d'Immunophysiologie et Parasitisme Intracellulaire - Chef d'Unité : Dr. Geneviève MILON Institut Pasteur, 28 rue du Dr Roux 75015 Paris ; e-mail directeur de stage : pilougoo@pasteur.fr ECOLE PRATIQUE DES HAUTES ETUDES SCIENCES DE LA VIE ET DE LA TERRE Analyse cinétique de la population des lymphocytes T CD4 murins après immunisation entérale avec Listeria monocytogenesrecombinante
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Hélène SAKLANI
Soutenu le 16 janvier 2002
RESUME Un modèle d'immunisation par voie entérale avecListeria monocytogenes recombinante, PIG41.A1, exprimant la protéine LACK deLeishmania majorla souris BALB/c. , a été mis au point chez surLa cohérence des résultats obtenus repose l'optimisation de la technique d'inoculation intragastrique (IG), soulignant l'importance de l'adaptation à un pH acide de la bactérie, préalable à l'injection. La capacité, peu étudiée jusqu'alors, deL. monocytogenesrecombinante à activer des lymphocytes T CD4 de type 1, réactifs à la protéine codée par le gène rapporté, a été observée. Après une immunisation, des lymphocytes T CD4 réactifs à LACK ont été retrouvés dans la rate, les organes lymphoïdes associés à l'intestin (GALT) (plaques de Peyer et ganglions mésentériques), au niveau d'un organe non lymphoïde (le foie) et sous forme circulante dans le sang. Dans tous ces compartiments, l'activité des lymphocytes T CD4 spécifiques de type 1, mesurée par la sécrétion d'interféron (IFN) g après réactivation des cellules en présence du peptide immunodominant 158-173 de LACK, débute et culmine au cinquième jour après l'inoculation IG de PIG41.A1. Dans la rate, cette sécrétion d'IFNg est détectée jusqu'à au moins 39 jours, le pic correspondant à une augmentation de 50 fois du nombre de cellules T CD4 réactives à LACK ; ce dernier se maintient au cours du temps mais la capacité des cellules à sécréter de l'IFNg diminue. La sécrétion d'IFNg n'est observée que transitoirement dans les cellules des organes analysés du GALT : au cinquième jour après l'inoculation IG des bactéries, dans les ganglions mésentériques, et aux cinquième et sixième jours dans les plaques de Peyer. Les lymphocytes T CD4 réactifs à LACK sont recrutés efficacement dans les organes non lymphoïdes tels le foie alors même qu'une colonisation très transitoire par PIG41.A1 y a été observée. Ces lymphocytes sont d'ailleurs détectés sous forme circulante dans le sang du jour 7 au jour 39 après l'inoculation IG de PIG41.A1. Si la réponse T CD4 de type 1 spécifique de LACK est forte au niveau de tous ces compartiments, il a été aussi observé une sécrétion d'IL4 très transitoire en réponse à ce même peptide dans les plaques de Peyer (J5), le foie (essentiellement J6 et J7), et le sang (J7). La réponse immunitaire induite après 2 et 3 immunisations par voie IG a aussi été étudiée dans la rate, les ganglions mésentériques et le sang ; l'induction de lymphocytes T CD4 réactifs à LACK n'est pas modifiée de manière notable, allant de pair avec l'absence quasi totale de bactéries observée dans ces compartiments lors des inoculations secondaires. Les lymphocytes T CD4 de type 1 réactifs à LACK sont détectés dès le septième jour dans le ganglion drainant le site d'une infection cutanée parL. majorimmunisés trois fois paret permettent de contenir le processus parasitaire : 80% des animaux 4 PIG41.A1, puis infectés par 5x10 promastigotes deL. major, contrôlent l'infection. Ceci est corrélé avec une diminution du nombre de parasites dans la patte infectée des animaux immunisés, à partir du vingt-et-unième jour de l'infection parL. major; par contre aucune diminution n'est notée dans le ganglion drainant le site d'infection. Malgré la faiblesse, au niveau cellulaire, de la restimulation lors des deuxième et troisième immunisations, les rappels 5 entraînent cependant un contrôle plus efficace de l'infection par 2x10 promastigotes deL. major: le délai d'apparition de la lésion et le niveau de protection augmentent avec le nombre d'immunisations. Mots clés :Listeria monocytogenes; vecteur d'immunisation ; oral ; intragastrique ; lymphocytes T CD4 ;Leishmania major. TABLE DES MATIERES
ABRÉVIATIONS .......................................................................................................................................................... 7
INTRODUCTION ........................................................................................................................................................ 8 A)Listeria monocytogenes.............................................................................................................................. 8 1)Epidémiologie des infections àListeria
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monocytogenes.................................................................... 8 2) Microbiologie .................................................................................................................................................... 10 3)Pathogénie - facteurs de virulence........................................................................................................... 10 4)Réponse immunitaire de l'hôte................................................................................................................... 12 a - Réponse primaire.................................................................................................................................... 12 ¨ Réponse immunitaire innée................................................................................................................ 13 ¨ Réponse immunitaire adaptative. Intervention des lymphocytes Tab............................... 13 ¨ Cytokines et médiateurs solubles produits par les cellules de l'hôte..................................... 15 ¨ Données expérimentales associées à la propagation de la bactérie et au développement des effecteurs immuns chez la souris................................................................... 16 ¨ Retour à l'homéostasie dans les tissus............................................................................................ 17 b - Réponse secondaire................................................................................................................................ 18 5)Infection par inoculation par voie orale................................................................................................... 19 a - Données de base sur la muqueuse intestinale et le système lymphoïde associé [GALT (Gut Associated Lymphoid Tissue)]......................................................................................... 19 b - Bilan des connaissances sur l'infection par voie entérale chez la souris............................... 23 6)L. monocytogenesrecombinante: vecteur d'immunisation.............................................................. 26 a - Les caractères positifs deL. monocytogenespour remplir ce rôle...................................... 26 b - Revue des études menées avecL. monocytogenesrecombinante comme vecteur d'immunisation .................................................................................................................................. 28 ¨ Réponses antivirales induites parL. monocytogenesrecombinante................................... 28 ¨ Réponses antitumorales induites parL. monocytogenesrecombinante............................. 29 ¨ Réponses antiparasitaires induites parL. monocytogenesrecombinante......................... 30 B)Leishmania major.......................................................................................................................................... 30 1)Les
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