Ancrage du cytosquelette microfilamenteux à la membrane, interaction et régulation de la plastine L avec la chaîne ? cytoplasmique des intégrines
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Niveau: Supérieur
MINISTERE DE LA JEUNESSE, DE L'EDUCATION NATIONALE ET DE LA RECHERCHE ECOLE PRATIQUE DES HAUTES ETUDES Sciences de la Vie et de la Terre MEMOIRE présenté par Emilie LE GOFF Pour l'obtention du Diplôme de l'Ecole Pratique des Hautes Etudes Ancrage du cytosquelette microfilamenteux à la membrane, interaction et régulation de la plastine L avec la chaîne ? cytoplasmique des intégrines Soutenu le 5 octobre 2005 à Montpellier devant le jury suivant : Monsieur le Docteur Thierry Dupressoir Président Madame le Docteur Marie-Christine Lebart Rapporteur Monsieur le Docteur Nadir Bettache Examinateur Monsieur le Docteur Yvan Boublik Examinateur Laboratoire EPHE de Motilité Cellulaire UMR 5539 (cc 107), Place Eugène Bataillon 34095 Montpellier Cedex 05 Directeur du laboratoire : Dr BENYAMIN Yves () Tuteur pédagogique et scientifique : Dr LEBART Marie-Christine () EPHE Banque de Monographies SVT 1
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MINISTERE DE LA JEUNESSE, DE L'EDUCATION NATIONALE ET DE LA RECHERCHE ECOLE PRATIQUE DES HAUTES ETUDES Sciences de la Vie et de la Terre MEMOIRE présenté par Emilie LE GOFF Pour l'obtention du Diplôme de l'Ecole Pratique des Hautes Etudes Ancrage du cytosquelette microfilamenteux à la membrane, interaction et régulation de la plastine L avec la chaîne ? cytoplasmique des intégrines Soutenu le 5 octobre 2005 à Montpellier devant le jury suivant : Monsieur le Docteur Thierry Dupressoir Président Madame le Docteur Marie-Christine Lebart Rapporteur Monsieur le Docteur Nadir Bettache Examinateur Monsieur le Docteur Yvan Boublik Examinateur Laboratoire EPHE de Motilité Cellulaire UMR 5539 (cc 107), Place Eugène Bataillon 34095 Montpellier Cedex 05 Directeur du laboratoire : Dr BENYAMIN Yves () Tuteur pédagogique et scientifique : Dr LEBART Marie-Christine () EPHE Banque de Monographies SVT 1
- sites de coupure
- coupures sur l'interaction plastine-intégrine
- interaction
- protéine kinase
- actine
- famille des protéines apparentées
- intégrine
- protéines de pontage
- phosphate buffered saline
- nm de diamètre
MINISTERE DE LA JEUNESSE, DE L’EDUCATION NATIONALE ET DE LA RECHERCHE
ECOLE PRATIQUE DES HAUTES ETUDES Sciences de la Vie et de la Terre
MEMOIRE présenté par Emilie LE GOFF
Pour l’obtention du Diplôme de l’Ecole Pratique des Hautes Etudes Ancrage du cytosquelette microfilamenteux à la membrane, interaction et régulation de la plastine L avec la chaîneβ cytoplasmique des intégrines Soutenu le 5 octobre 2005 à Montpellier devant le jury suivant : Monsieur le Docteur Thierry Dupressoir Président Madame le Docteur Marie-Christine Lebart Rapporteur Monsieur le Docteur Nadir Bettache Examinateur Monsieur le Docteur Yvan Boublik Examinateur Laboratoire EPHE de Motilité Cellulaire UMR 5539 (cc 107), Place Eugène Bataillon 34095 Montpellier Cedex 05 Directeur du laboratoire : Dr BENYAMIN Yves (benyamin@univ-montp2.fr) Tuteur pédagogique et scientifique : Dr LEBART Marie-Christine (arebunt@clmrf.2m-viptno)
ECOLE PRATIQUE DES HAUTES ETUDES SCIENCES DE LA VIE ET DE LA TERRE
ANCRAGE DU CYTOSQUELETTE MICROFILAMENTEUX A LA MEMBRANE, INTERACTION ET REGULATION DE LA PLASTINE L AVEC LA CHAÎNEβ CYTOPLASMIQUE DES INTEGRINES Emilie LE GOFF
Résumé : Le cytosquelette a un rôle primordial dans l’adhésion et la motilité cellulaire, il donne à la cellule sa forme, sa motilité, sa capacité à ordonner les organites et gérer leurs transports intracellulaires. Il existe de nombreuses protéines capables de s’associer au cytosquelette dont celles qui interagissent avec les microfilaments d’actine, c’est à dire les ABPs « Actin Binding Proteins », elles influent sur leur disposition et leur dynamique. La plastine L (65 kDa) est la plus petite des protéines de pontage des microfilaments appartenant à la famille des protéines apparentées à l’a-actinine et elle a un rôle important dans la motilité cellulaire. Elle permet la formation de faisceaux très serrés du système microfilamenteux. Elle est constituée de deux domaines de liaison à l’actine ABD « Actin Binding Domain » en COOH terminal (ABD1 et ABD2) ainsi que deux sites de liaison au calcium et un site de phosphorylation situés dans sa partie NH2terminale. Des travaux du laboratoire ont déjà démontré que les interfaces plastine L-actine et a-actinine-actine se ressemblent considérablement. De plus, des interactions entre les chaînesβdes intégrines et certaines protéines de pontage de la même famille ont été montrées, notamment pour l’a-actinine et la filamine. Dans ce contexte, nous avons d’abord mis en évidence par immunoprécipitation qu’un complexe plastine L/chaîneβ1 ouβ2 d’intégrine existaitin cellulo. A l’aide de différentes techniques (ELISA, pontages chimiques, « pull-down »), nous avons ensuite démontré cette interactionin vitro utilisant le domaine cytoplasmique de la chaîne enβ1 d’intégrine ainsi qu’avec deux petits peptidesβ1 etβ Nous avons ensuite mis en évidencela plastine L sont portés par les domaines de liaison à l’actine. sites d’interaction de 2 d’intégrine. Les que cette interaction était plus forte à faible force ionique et qu’elle n’était pas régulée par la présence de calcium. Nous avons montré que la calpaïne 1 clivait la plastine L ainsi que le domaine entier b1 cytoplasmique et le peptideβ ces coupures sur avoir localisé les sites de coupure, nous nous sommes alors intéressés à l’effet de2 d’intégrine. Après l’interaction plastine-intégrine. Nous avons pu alors conclure que la calpaïne 1 semblait réguler cette interaction par le biais d’une coupure dans le domaine cytoplasmique de l’intégrine mais que le clivage de la plastine L n’intervenait pas directement dans la régulation de cette interaction. Mots-clés :actine, plastine, intégrine, calpaïne, calcium, peptides. INTRODUCTION 1 Introduction générale 1 I- L’actine I-1- Généralités 2
Sommaire
I-2- L’actine G 4 I-3- L’actine F 6 I-4- Polymérisation de l’actine 8 I-5- Les protéines associées l’actine 11 a) Les protéines de séquestration 12 b) Les protéines de coiffe 13 c) Les protéines de fragmentation 13 d) Les protéines de pontage 13 e) Les protéines d’ancrage 16
II- La plastine II-1- Généralités 16 II-2- Structure 18 II-3- Interaction avec l’actine F et régulation 23 II-4- Rôle dans la cellule 24
III- Les intégrines III-1- Généralités 25 III-2- Structure 26 III-3- Interaction du domaine cytoplasmique avec le cytosquelette 27
IV- Les calpaïnes IV-1- Généralités 31 IV-2- Structure des calpaïnes ubiquitaires 33 IV-3- Rôle des calpaïnes au niveau du cytosquelette 34 Liste des abréviations
ABD :Actin Binding Domain ABP :Actin Binding Protein Ac :Anticorps actine F :Actine Filamenteuse actine G :Actine Globulaire ADF :Actin Depolymerizing Factor ADNc :Acide désoxyribonucléïque complémentaire
