MINISTERE DE L'EDUCATION NATIONALE
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Niveau: Supérieur
MINISTERE DE L'EDUCATION NATIONALE ECOLE PRATIQUE DES HAUTES ETUDES Sciences de la vie et de la terre THESE de DOCTORAT Biologie cellulaire et moléculaire présentée et soutenue publiquement le 25 juin 2002 par Anne-Marie FRAOLINI-ROBRÉAU pour l'obtention du grade de DOCTEUR de l'Ecole Pratique des Hautes Etudes CONTRIBUTION A L'ÉTUDE DES BASES MOLÉCULAIRES DES PORPHYRIES HÉPATIQUES AIGUËS ET DE LA PROTOPORPHYRIE ÉRYTHROPOÏÉTIQUE. Directeur de thèse E.P.H.E. : M. Bernard MIGNOTTE devant le jury suivant : Monsieur Jean-Charles DEYBACH Monsieur Jean-Marie LAUNAY Monsieur Philippe de MAZANCOURT Monsieur Bernard MIGNOTTE boratoire de Génétique Moléculaire et Physiologique de l' E.P.H.E. (Université de Versailles/St Quentin Bâtiment Fermat-45, av des Etats- is-78035 Versailles Cedex) ; E-mail : boratoire de Biochimie et Génétique Moléculaire ; CHU. Colombes (178, rue des Renoulliers-92700 Colombes) FR X. Bichat (Directeur : JC. Deybach) ; E-mail : Les porphyries sont des maladies génétiques le plus souvent de transmission autosomique dominante, caractérisées par un déficit enzymatique partiel spécifique d'une des enzymes de la chaîne de biosynthèse de l'hème. En fonction du tissu dans lequel prédomine le déficit, les porphyries sont classées en porphyries érythropoïétiques : la protoporphyrie (PPE) et la maladie de Günther, et en porphyries hépatiques : porphyrie aiguë intermittente (PAI), porphyrie variegata (
Voir
MINISTERE DE L'EDUCATION NATIONALE ECOLE PRATIQUE DES HAUTES ETUDES Sciences de la vie et de la terre THESE de DOCTORAT Biologie cellulaire et moléculaire présentée et soutenue publiquement le 25 juin 2002 par Anne-Marie FRAOLINI-ROBRÉAU pour l'obtention du grade de DOCTEUR de l'Ecole Pratique des Hautes Etudes CONTRIBUTION A L'ÉTUDE DES BASES MOLÉCULAIRES DES PORPHYRIES HÉPATIQUES AIGUËS ET DE LA PROTOPORPHYRIE ÉRYTHROPOÏÉTIQUE. Directeur de thèse E.P.H.E. : M. Bernard MIGNOTTE devant le jury suivant : Monsieur Jean-Charles DEYBACH Monsieur Jean-Marie LAUNAY Monsieur Philippe de MAZANCOURT Monsieur Bernard MIGNOTTE boratoire de Génétique Moléculaire et Physiologique de l' E.P.H.E. (Université de Versailles/St Quentin Bâtiment Fermat-45, av des Etats- is-78035 Versailles Cedex) ; E-mail : boratoire de Biochimie et Génétique Moléculaire ; CHU. Colombes (178, rue des Renoulliers-92700 Colombes) FR X. Bichat (Directeur : JC. Deybach) ; E-mail : Les porphyries sont des maladies génétiques le plus souvent de transmission autosomique dominante, caractérisées par un déficit enzymatique partiel spécifique d'une des enzymes de la chaîne de biosynthèse de l'hème. En fonction du tissu dans lequel prédomine le déficit, les porphyries sont classées en porphyries érythropoïétiques : la protoporphyrie (PPE) et la maladie de Günther, et en porphyries hépatiques : porphyrie aiguë intermittente (PAI), porphyrie variegata (
- porphyries
- bases moléculaires
- techniques d'identification rapide des mutations
- porphyrie variégata
- biosynthèse de l'hème
- mutation délétère du gène fech responsable de la ppe
- déficit enzymatique
MINISTERE DE L'EDUCATION NATIONALE ECOLE PRATIQUE DES HAUTES ETUDES Sciences de la vie et de la terre THESE de DOCTORAT Biologie cellulaire et moléculaire présentée et soutenue publiquement le 25 juin 2002 par Anne-Marie FRAOLINI-ROBRÉAU pour l'obtention du grade de DOCTEUR de l'Ecole Pratique des Hautes Etudes CONTRIBUTION A L'ÉTUDE DES BASES MOLÉCULAIRES DES PORPHYRIES HÉPATIQUES AIGUËS ET DE LA PROTOPORPHYRIE ÉRYTHROPOÏÉTIQUE. Directeur de thèse E.P.H.E. : M. Bernard MIGNOTTE devant le jury suivant : Monsieur Jean-Charles DEYBACH Monsieur Jean-Marie LAUNAY Monsieur Philippe de MAZANCOURT Monsieur Bernard MIGNOTTE de Génétique Moléculaire et Physiologique de l' E.P.H.E. (Université de Versailles/St Quentin Bâtiment Fermat-45, av des Etats--78035 Versailles Cedex) ; E-mail:mignotte@genetique.uvsq.fr de Biochimie et Génétique Moléculaire ; CHU. Colombes (178, rue des Renoulliers-92700 Colombes) FR X. Bichat (Directeur : JC. Deybach) ; E-mail : jean-charles.deybach@lrb.ap-hop-paris.fr Les porphyries sont des maladies génétiques le plus souvent de transmission autosomique dominante, caractérisées par un déficit enzymatique partiel spécifique d’une des enzymes de la chaîne de biosynthèse de l’hème. En fonction du tissu dans lequel prédomine le déficit, les porphyries sont classées en porphyries érythropoïétiques : la protoporphyrie (PPE) et la maladie de Günther, et en porphyries hépatiques : porphyrie aiguë intermittente (PAI), porphyrie variegata (PV), coproporphyrie héréditaire (CH) et porphyrie cutanée. Leur faible pénétrance et la gravité potentielle des crises aiguës rendent indispensable la détection des porteurs asymptomatiques au sein des familles identifiées. Dans la première partie de ce travail, nous avons caractérisé les bases moléculaires de la PAI et de la PV, nécessaires au diagnostic moléculaire des porphyries. L’optimisation technologique a permis de mettre au point les techniques d’identification rapide des mutations (DGGE, HA, séquençage direct) adaptées à chacune des porphyries. L'épidémiologie moléculaire de la PAI et de la PV en France est caractérisée par une grande hétérogénéité moléculaire (204 mutations différentes pour la PAI, et 110 pour la PV). Pour les porphyries de transmission autosomique dominante, le conseil génétique est fortement limité par leur pénétrance incomplète ainsi que leur expressivité clinique variable. Dans la deuxième partie de ce travail, nous nous sommes intéressés à un
aspect des mécanismes de pénétrance consistant à envisager que l'allèle sain en trans d'une mutation délétère puisse contribuer à l'expression phénotypique de la maladie. Par une approche à la fois statistique et fonctionnelle, nous avons démontré que la pénétrance d'une mutation délétère du gèneFECH de la PPE est modulée par la présence d'un responsable polymorphisme fonctionnel IVS3-48T/C. Par contre la pénétrance des porphyries hépatiques aiguës n'apparaît pas modulée par ce mécanisme suggérant plutôt l'intervention de facteurs génétiques non liés au locus majeur en interaction avec des facteurs environnementaux. porphyrie pénétrance mutation dominance polymorphisme diagnostic Molecular basis study of acute hepatic porphyrias and erythropoietic protoporphyria. PLAN I / INTRODUCTION p4 A. Historique B. Rappels métaboliques B.1. Les précurseurs B.2. Les porphyrines B.3. La voie de biosynthèse de l'hème B.4. Dégradation de l'hème C.Les porphyries C.1. Les porphyries héréditaires C.1.1. Les porphyries hépatiques Les porphyries hépatiques aiguës Les porphyries cutanées : tardive et familiale C.1.2. Les porphyries érythropoïétiques C.2. Les porphyries acquises D. Les porphyries hépatiques aiguës D.1. La crise aiguë D.2. Les données biologiques D.3. Les déficits enzymatiques spécifiques D.4. Traitement - prévention D.5. Bases moléculaires des porphyries hépatiques aiguës D.5.1. Porphyrie aiguë intermittente D.5.2. Porphyrie variégata D.5.3. Coproporphyrie héréditaire E. La protoporphyrie érythropoïétique E.1. Signes cliniques
E.2. Diagnostic biologique E.3. Bases moléculaires II / BUT DE L'ETUDE p61 III / MATERIEL ET METHODES p63 A. Patients B. Extraction et amplification de l'ADN C. Méthodes de criblage moléculaire C.1. DGGE C.2. HA D. Purification et séquençage des produits amplifiés E. Clonage et expression en vecteur procaryote IV / BASES MOLECULAIRES DES PORPHYRIES HEPATIQUES AIGUES p73 A. PORPHYRIE AIGUE INTERMITTENTE A.1. Introduction A.2. Résultats A.3. Discussion B. PORPHYRIE VARIEGATA B.1. Introduction B.2. Résultats B.3. Discussion V / MARQUEURS MOLECULAIRES DE LA PENETRANCE p110 A. INTRODUCTION B. PROTOPORPHYRIE ERYTHROPOIETIQUE B.1. Introduction B.2. Résultats B.3. Discussion C. PORPHYRIES HEPATIQUES AIGUES C.1. Introduction C.2. Matériel et Méthodes C.3. Résultats et Discussion VI / CONCLUSIONS ET PERSPECTIVES p131 VII / BIBLIOGRAPHIE p134 LISTE DES PRINCIPALES ABRÉVIATIONS ALA : Acidedeuquvélinil anomi
