IDENTIFICACIÓN Y CUANTIFICACIÓN DE HONGOS MICOTOXIGÉNICOS EN ALIMENTO PARA BOVINOS

IDENTIFICACIÓN Y CUANTIFICACIÓN DE HONGOS MICOTOXIGÉNICOS
EN ALIMENTO PARA BOVINOS
1 2 ⌂ 1 1René Santibáñez Escobar , Margarita Hernández Gallardo , Oziel Dante Montañez Valdez , José María Tapia González ,
1 3,4José Alejandro Martínez Ibarra , Juan Humberto Avellaneda Cevallos ,
1Departamento de Desarrollo Regional, Centro Universitario del Sur, Universidad de Guadalajara, Av. Prolongación Colón
⌂ s/n Km 1 Ciudad Guzmán-Guadalajara Ciudad Guzmán Jalisco. montanez77@hotmail.com
2Departamento de Salud Pública, Centro Universitario de Ciencias Biológicas y Agropecuarias, Universidad de Guadalajara,
Km 15.5 carretera a Nogales, Predio Las Agujas, Zapopan Jalisco
3Unidad de Investigación Científca y Tecnológica, Universidad Técnica Estatal de Quevedo, km 7 vía
Quevedo - El Empalme, C. P. 73. Mocache, Los Ríos, Ecuador
4Escuela Superior Politécnica Agropecuaria de Manabí Manuel Félix López, Ecuador
R A RA
e identifcó y cuantifcó cepas fúngicas productoras dentifed and quantifed Mycotoxin-producing fungal Sde micotoxinas y grado de contaminación por Istrains was identifed and quantifed, and the degree
afatoxinas B , B , G y G , en alimento para bovinos en of contamination of afatoxins B , B , G and G , in the
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el municipio de Zapotlán, El Grande Jalisco, México. cattle food in the town of Zapotlán El Grande Jalisco,
Se tomaron muestras de alimento para vacas lecheras México was determined. Samples were fed to dairy cows
y ganado de engorda de 30 unidades productoras. and beef cattle 30 production units. The identifcation
La identifcación de las cepas fúngicas productoras of mycotoxin-producing fungal strains was performed
de micotoxinas se realizó mediante caracterización by characterizing macroscopic colonies grown under
macroscópica de colonias cultivadas bajo la técnica the plate casting technique, and the subsequent
de vaciado en placa, y la identifcación posterior de identifcation of the microscopic morphology of the
la morfología microscópica del hongo, para la cual se fungus, for which isolated the strains identifed by the
aislaron las cepas identifcadas mediante la técnica de technique microculture. Quantifcation of fungal strains
microcultivo. La cuantifcación de cepas fúngicas se was performed by counting colony forming units (CFU)
realizó mediante el conteo de unidades formadoras de and classifed under the criteria of three scales: a) low
2 3 4 5colonias (UFC) y clasifcadas bajo el criterio de tres counts (10 -10 ), b) moderate counts (10 - 10 ) and c)
2 3 6 7escalas; a) Recuentos bajos (10 -10 ); b) Recuentos high counts (10 -10 ). To identify the type of afatoxin
4 5 6 7moderados (10 – 10 ) y c) Recuentos altos (10 – 10 ). used the technique of thin layer chromatography. Of the
Para la identifcación del tipo de afatoxinas se utilizó la samples were obtained CFU counts in the following
6 7 -1técnica de cromatografía en capa fna. De las muestras proportions: high counts (10 -10 CFU g ) 56.66%,
4 5 -1procesadas se obtuvieron recuentos de UFC en la moderate counts (10 -10 CFU g ) 36.66% and low
6 7 2 3 -1siguiente proporción: Recuentos altos (10 -10 UFC counts (10 -10 CFU g ) 6.66%. A total of 148 fungal
-1 4 5 -1g ) 56.66%, recuentos moderados: (10 -10 UFC g ) strains were isolated, the highest percentages correspond
2 3 -136.66%, recuentos bajos: (10 -10 UFC g ) 6.66%. Se to the following genera: Cladosporium spp., Penicillium
aislaron un total de 148 cepas fúngicas, correspondiendo spp. and Aspergillus spp. 33.33% were detected afatoxin
los porcentajes más altos a los siguientes géneros: positive samples, among which were identifed B , B ,
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Cladosporium spp., Penicillium spp. y Aspergillus spp. G and G , all in high concentrations, also was obtained
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Se detectaron 33.33% de muestras positivas a afatoxinas, 46.66% of samples with positive fuorescence did not
dentro de las cuales se identifcaron B , B , G y G , correspond to the standards of afatoxins and 20% of
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todas en alta concentración, con 46.66% de muestras negative samples.
con fuorescencia positiva que no correspondieron a los
estándares de afatoxinas y 20% de muestras negativas.
Palabras claves: Bovinos, Alimento, Afatoxinas Key words: Bovine, Feedstuff, afatoxins.
Recibido: 8-Junio-2011. Recibido en forma corregida: 23-junio-2011.
Aceptado: 23-Junio-2011.
Publicado como ARTÍCULO en Ciencia y Tecnología 4(1): 19-23. 2011
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tebucmsenstSantibáñez, et al.
I R I
a contaminación por hongos del alimento para infantes y adolecentes, son también los más sensibles a Lbovino, causa serios problemas, dado que los tóxicos los efectos de la M . Por lo anterior el objetivo de este
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que producen, disminuyen la calidad del alimento y al trabajo es determinar y cuantifcar la cantidad de hongos
mismo tiempo, la respuesta animal causando con ello micotoxigénicos presentes en el alimento usado en las
una baja producción. Dentro de las sustancias tóxicas, explotaciones bovinas.
se encuentran las micotoxinas, defnidas como un
metabolito tóxico secundario producido por un moho, mA RIA y m
entre las que destacan las afatoxinas, las cuales han sido
objeto de amplias investigaciones en los últimos años, a investigación se llevó a cabo en treinta unidades
especialmente en relación con sus efectos. Durante Lde producción bovina en el municipio de Zapotlán,
muchos años el nombre de Aspergillus favus ha sido El Grande Jalisco, México, en las que se colectaron 30
considerado como el único productor de afatoxinas, muestras de dos kg de alimento comercial o alimento
pero en realidad es un grupo de especies de hongos elaborado y almacenado en la granja. Las muestras
los que pueden producir estos metabolitos (Flores fueron enviadas para su procesamiento al Laboratorio
et. al., 2006). Las afatoxinas pueden formarse, en de Salud Publica de la Facultad de Medicina Veterinaria
productos alimenticios antes y después de la cosecha, y Zootecnia de la Universidad de Guadalajara. El tiempo
se han encontrado cada vez con mayor frecuencia en que transcurrió del muestreo al análisis para cuantifcar
alimentos que se guardan en condiciones de humedad y e identifcar los hongos así como las afatoxinas no fue
temperaturas favorables a su desarrollo y en condiciones mayor a 36 h, para las siguientes determinaciones:
inadecuadas de almacenamiento. Las afatoxinas han sido
caracterizadas en cuatro grupos de distinto compuesto Identifcación de hongos mediante la técnica de
químico interrelacionados a los que se les llamó B (blue) cultivo de vaciado en placa.
y G (green) y los subíndices 1 y 2 para cada molécula
química relativa a su movilidad cromatográfca. Estos Preparación del medio de cultivo estéril
compuestos pueden separar o adicionar un radical utilizando 30 g de agar papa dextrosa en 1 L de agua.
alcohol, hidroxilo, oxidrilo o una doble ligadura lo que A cada 100 mL del medio se adiciona 1 mL de solución
da diferentes propiedades a cada uno de los compuestos rosa de bengala al 0.6% y 0.5 mL de una
(Peña y Duran 1990; Montemayor, 1993; Reyes et. al., de antibiótico, en este caso ampicilina de 200 mg
2009). del antibiótico en 10 mL de agua destilada estéril. a)
En el ganado productor de leche al ingerir Vaciado de las placas. Se preparan las placas de cultivo
dosis diarias de 2,300 a 4,200 ppb de afatoxina B , estériles adicionando 15 mL del medio de cultivo. b)
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por un período de tres semanas a un mes producen un Se prepara una solución estéril de peptona de caseína al
deterioro marcado en la salud y a la vez una reducción 0.1% con un pH ajustado a 7 para hacer la dilución de
en el consumo de alimento, por lo que la producción de las muestras de alimento recolectadas. c) Dilución de
leche se disminuye. Además se ha reportado que cuando la muestra. Se diluyen 10 g de la muestra de alimento
la afatoxina B , es ingerida por bovinos, ésta inhibe las en 90 mL del agua peptonada (1 g de peptona, 8.5 g de
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bacterias ruminales, reduce la digestibilidad de la celulosa cloruro de sodio en un litro de agua ajustada a un pH 7
y baja la concentración de ácidos grasos volátiles y la con cloruro de sodio 1N) y de ésta se hacen diluciones
-2 -3 -4relación acético: propiónico (Hussein y Brasel, 2001; de 10 , 10 y 10 inoculando 1 mL de cada dilución
Masoero et al., 2007). La afatoxina M , es un metabolito en las placas de cultivo. d) Incubación. Se llevan a la
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de la B que se produce en el hígado de un animal o estufa de incubación a una temperatura de 20º C por
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persona que ha consumido alimento contaminado. La M un periodo de 72 a 120 horas. e) Microcultivo. De las
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es muy importante porque se acumula en leche, tejidos cepas aisladas del crecimiento fúngico se inoculan en
y huevo aproximadamente 24 h después del consumo microcultivos de agar papa dextrosa y se incuban por
de alim